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维生素C检测试剂盒(磷钼酸比色法)主要用于植物组织中的还原型维生素C(抗坏血酸)的检测。

在强酸和偏磷酸根离子存在条件下，钼酸铵能与还原型维生素C反应生成蓝色化合物，在一定浓度范围吸光度值与浓度呈线性关系，以分光光度计760nm处检测吸光度，获得Vitamin C含量。

• 蒸馏水
  
• 电子天平、研磨器或匀浆器
  
• 离心机、离心管或试管、水浴锅或恒温箱、分光光度计、比色皿

• Vitamin C标准避免反复冻融，以免失效或效率下降。
  
• 组织匀浆液A保存温度过低时易产生结晶，可用温水浴溶解后再使用。
  
• Vitamin C Assay buffer室温保存时间过长或者过期会出现白色粘稠物，不可使用，应换新的产品使用。不使用时建议4℃保存。
  
• 待测样品如不能及时测定，应置于2～8℃保存，3天内稳定。
  
• 如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

• 配制组织匀浆液：按组织匀浆液A∶组织匀浆液B∶蒸馏水=8∶1∶91的比例混匀即得。
  
• 准备样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量5g，加入研磨器内，再加入少量组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用组织匀浆液研磨，最后一并倒入50mL离心管，补充组织匀浆液至45mL，充分混匀，4000r/min离心5min，取0.5mL上清液，加入等量蒸馏水，即为待测液。
  
• 配制MPA工作液：称取0.3g MPA粉末，充分溶解于10mL酸性缓冲液I中，也可根据使用情况称取一定量的MPA按比例溶解即可，4℃保存3～4天有效。
  
• 配制Vitamin C Assay buffer：称取钼酸铵粉末0.5g，充分溶解于10mL蒸馏水中，也可根据使用情况称取一定量的钼酸铵加水按比例溶解即可，4℃避光保存。
  
  • 钼酸铵溶于水会逐渐变成乳白色浊液，则不能使用。
• 配制系列Vitamin C标准：将25mg Vitamin C标准用1mL组织匀浆液溶解即得Vitamin C标准(25mg/mL)，再用蒸馏水稀释成Vitamin C标准(250μg/mL)，取干净离心管或试管，按下表进行操作，依次稀释。Vitamin C标准(25mg/mL)放置-20℃，短期保存。
  

  加入物(mL)	1	2	3	4	5	6	7
  Vitamin C标准(250μg/mL)	0.2	0.3	0.4	0.5	0.6	0.8	1.0
  蒸馏水	0.8	0.7	0.6	0.5	0.4	0.2	0
  相当于Vitamin C浓度(μg/mL)	50	75	100	125	150	200	250

• 加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的Vitamin C含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
  

  加入物(mL)	空白管	标准管	测定管
  蒸馏水	0.4	－	－
  系列Vitamin C标准(1～8号)	－	0.4	－
  待测液	－	－	0.4
  1×组织匀浆液	0.8	0.8	0.8
  MPA工作液	0.2	0.2	0.2
  酸性缓冲液II	0.4	0.4	0.4
  Vitamin C Assay buffer	0.8	0.8	0.8

• Vitamin C测定：立即混匀，30℃水浴20min，以空白调零，比色杯光径1cm，以分光光度计测定760nm处系列标准管、测定管的吸光度。